Στην νέα ταινία, ο Ben Stiller επιστρέφει στο ρόλο του Larry Daley, ο οποίος γνωρίζει το μυστικό του μουσείου φυσικής ιστορίας της Νέας Υόρκης. Ότι δηλαδή τα εκθέματά του ζωντανεύουν το βράδυ χάρις σε μια μαγική πλάκα από την εποχή των Φαραώ. Μόνο που τώρα η πλάκα έχει αρχίσει να διαβρώνεται. Έτσι θα επιστρατευτεί η βοήθεια όλων των εκθεμάτων ώστε να ταξιδέψει η πλακέτα μέχρι το Βρετανικό Μουσείο του Λονδίνου, όπου ο πατέρας του Pharaoh Ahkmenrah (Rami Malek), ο οποίος είναι ο Δημιουργός (Ben Kingsley) της πλάκας, θα προσπαθήσει να την «επιδιορθώσει».
Στο ταξίδι θα συνοδέψουν τον Larry οι Teddy Roosevelt (Robin Williams), Attila the Hun (Patrick Gallagher), Sacajawea (Mizuo Peck), Roman centurion Octavius (Steve Coogan) και ο Jedediah (Owen Wilson), ενώ στο Λονδίνο θα συναντήσουν τον Lancelot (Dan Stevens) και την φρουρό του μουσείου Rebel Wilson.
